1.病原学检查
(1)髂骨穿刺 抽取少许骨髓,制成涂片,染色后镜检。此法的利什曼原虫检出率约在85%左右。合并HIV感染的利什曼病患者,检出率可达98%。
(2)脾脏穿刺 吸出脾髓,针头拔出后,即将针头内的脾髓注射于玻片上,制成涂片,染色镜检。脾穿刺法的原虫检出率很高,可达95%左右。
(3)淋巴结穿刺 淋巴液制成涂片,染色镜检。该法对初诊病人而言,原虫的检出率一般为50%左右,但合并HIV感染的利什曼病患者,检出率可达100%。
(4)皮肤刮片检查 制成涂片后染色镜检。如是PKDL,一般都能查见利什曼原虫。
(5)原虫培养 在严格的无菌操作下,把可疑病人的骨,脾、淋巴结或皮肤损害内所取得的各种组织液置三恩培养基内,放入22~24℃温箱内培养。15天后用白金耳取少量培养液于玻片上,在光学显微镜(高倍)下检查,如查见利什曼原虫前鞭毛体,即可确定诊断。
2.血清学检查
利什曼病免疫诊断新技术可用于检测感染宿主体内的循环抗体、循环抗原和循环免疫复合物。在辅助病原诊断及判断流行情况方面起着重要的作用。目前主要应用的为抗体检测和抗原检测两大类,其中检测抗体的技术有以下3种。
(1)免疫荧光测定(IFAT) 利什曼病IFAT试验的阳性率为100%,抗体滴度最低为1:320,最高为1:5120,与健康人及其他疾病的交叉反应,抗体滴度不超过1:20。
(2)酶联免疫吸附试验(ELISA)和斑点-酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA) 凡大于或等于阴性对照OD均值(x)加3个标准差(SD)可判为阳性,利什曼病ELISA与病原检查阳性的符合率为100%。值得注意的是与麻风病有23%的交叉反应。
Dot-ELISA是在ELISA基础上发展的一种简易的、而敏感和特异性均不亚于ELISA的检测方法。观察结果乃根据斑点的出现与否,目测即可,不受分光光度计读数的限制。而且记录可长期保存。利什曼病患者的血清,在稀释度为1:100~1:800时均可出现蓝色斑点,与病原检查阳性的符合率为97.6%。与疟疾、肺吸虫、麻风等疾病未出现交叉反应。
(3)免疫层析诊断试条(ICT) 检测时,取利什曼病患者全血或血清一滴(约20~30μl)于样本垫上,通过层析,于3~5分钟内,出现与抗原结合的阳性条带,目测即可。此法快速敏感,与病原检查的符合率可达100%。
利什曼病循环抗原的检测不但可提示宿主的活动性感染,亦可反映感染度及用作疗效考核。常用的技术有以下3种。
1)酶标记单克隆抗体斑点-ELISA直接法:此法检测利什曼病现症患者血清中相应的CAg,阳性率为90.6%。直接法实验操作简便,全过程为4小时。单克隆抗体-抗原斑点试验(McAb-AST),亦用于利什曼病循环抗原的检测,其检测阳性率为97%。上述两种方法都可用来对利什曼病作疗效考核。
2)单克隆抗体-酶联免疫印渍技术(McAb-EITB)。
3)双抗体夹心斑点-酶联免疫吸附试验(SandwichDot-ELISA)。