可分为TP直接检查、梅毒血清试验及脑脊液检查。1.TP直接检查可取病灶组织渗出物、淋巴结穿刺液或组织研磨液，用暗视野显微镜、镀银染色、吉姆萨染色或直接免疫荧光检查等方法。2.梅毒血清试验梅毒血清试验是梅毒主要的检查方法和确诊的主要依据，分为非特异性试验（包括RPR、TRUST和VDRL试验）和特异性试验（包括TPHA、TPPA和FTA-ABS）。非特异性试验为采用免疫学方法检测血清中的心磷脂抗体，作为梅毒的诊断筛选试验。本试验敏感性高而特异性低。阳性结果时，可初步诊断。定量试验是观察疗效、判断复发及再感染的手段。一期梅毒硬下疳出现后的2～3周内可出现假阴性。特异性试验即梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性结果可明确诊断。但常呈持久阳性，不可用于观察、判断疗效。3.脑脊液检查主要用于神经梅毒的诊断，包括白细胞计数、蛋白定量、VDRL、PCR和胶体金试验。一般不作为一期梅毒的诊断方法。